Електронна мікроскопія

JEM-1400 дозволяє отримувати високо контрастні зображення, так як він облаштований високо контрастним полюсним наконечником об’єктвної лінзи. Це забезпечує проведення високо контрастних ТЕМ-спостережень на всіх збільшеннях, що є критично необхідним в клінічних дослідженнях, імунології, фармацевтиці, де зразки переважно містять в собі легкі елементи.

На відміну від інших трансмісійних мікроскопів, JEM-1400, хоч і оснащений стандартною оптичною системою, проте вона повністю програмована та налаштовувана комп’ютером. Передвстановлені налаштування астигматизму та центрування забезпечують простоту оперування навіть для початківців. Гоніометр з боковим входом має комп’ютер-контрольовані осі, що забезпечує збереження різкості при переході на інші збільшення.

Оснащення цифровою камерою (CCD камера), що екіпірована спеціальною оптичною лінзою, забезпечує високу роздільну здатність на периметрі всього спостережуваного зображення. Це дозволяє отримувати фото швидко і просто без втрати якості. Також, цифрова технологія реалізує автоматичне фокусування та корегування на операційному екрані. Окрім цифрової, на мікроскопі JEM-1400 встановлена фотокамера для реєстрації електронних зображень на фотопластинках.

Характеристики мікроскопа

• Роздільна точкова здатність – 0,38 нм;
• Прискорююча напруга – від 40 до 120 кВ;
• Розмір точки (діаметр) – 0,2-6 мкм;
• Збільшення – від х200 до х1,200,000;
• Електронна гармата – центрований вольфрамовий філамент;
• Платформа зразка – п’ятиосевий гоніометр з автоматичним повітряним замком.

Основні завдання, вирішувані на ТЕМ JEM-1400

Цитоморфологічні аналізи медико-біологічних зразків для діагностичних та дослідницьких задач в області цитології, мікробіології і вірусології.

Матеріал для аналізу

• будь-який біологічний матеріал – фрагменти тканин, культури клітин, суспензії грибів, бактерій, вірусів.
• небіологічний матеріал манометрового діапазону (вуглецеві нанотрубки, нанокомпозити, та ін.).

Варіанти здійснюваних аналізів

Біологія і медицина

• Вивчення субклітинної організації, клітинних процесів, топографії поверхні та інші локальні характеристики структурних елементів і органел в зразках тканин, культурах клітин, біоплівках і т.п.
• Особливості синтезу та морфології вірусних часток в рослинних і тваринних клітинах, культурах клітин, мікроорганізмах.
• Аналіз клітинних змін під дією фізичних та хімічних факторів.
• Диференціювання процесів апоптозу та некрозу.
• Активність і локалізація ферментних систем (фосфатази, пероксидази, дегідрогінази).
• Особливості міжклітинних взаємодій.
• Структурні особливості і компонентний склад полісахаридів за специфічністю зв’язування з міченими лектинами.
• Локалізація білків за маркерними антитілами.

Нанотехнології

• Нанометрологія.
• Взаємодія живих об’єктів з наноматеріалами.

Медицина

• Гістогенез пухлин для прогнозування онкологічних захворювань.
• Аналіз тканин нирок, отриманих шляхом пункціної біопсії, для виявлення ранніх морфологічних змін, діагностики форми гломерулонефриту та ін.
• Аналіз пунктатів печінки з метою диференційної діагностики гепатитів, гепатозів та інших захворювань печінки.

Прикладні аспекти

• Вияв мікоплазм і мікробної контамінації клітинних ліній.
• Аналіз на чистоту/контамінацію мікробіологічних зразків за цитоморфологічними ознаками (форма, розміри, спорідненість до ураніл ацетату і ФВК).
• Підрахунок клітин на одиницю об’єму.

Основні методичні підходи

• Негативне і позитивне контрастування.
• Порівняльна мікроскопія ультратонких зрізів методами електронної і світлової/люмінесцентної мікроскопії.
• Гістохімія.
• Імуно-ТЕМ.
• Отримання тривимірних зображень об’єктів нано- і мікрометрового діапазону (3D-томографія).
• Дифракція (1 і 2).

Реактиви і витратні матеріали

Співробітники НАН України можуть отримати деякі хімічні реактиви, що надаються ЦКПП НАНУ для пробопідготовки по ряду задач. Реактиви надаються в строго оговорених кількостях згідно поданої і затвердженої заявки.

Наявність реактивів уточнювати у спеціалістів по телефону або через електронну пошту.

В 2015 году співробітники НАНУ можуть розраховувати на:
• фосфорновольфрамова кислота
• компоненти для заливки зразків в смолу епон 812
• глутаровий альдегід
• параформальдегід
• цитрат свинцю
• пластини для приготування скляних ножів

Приладова база

Порядок виконання робіт

Для співробітників НАН України:
В рамках бюджетних тематик роботи на мікроскопі та доступ до відповідного обладнання центру колективного користування приладами НАН України здійснюється безкоштовно відповідно поданій і затвердженій заявці в порядку черги. При цьому, обов’язковим є знання принципів роботи на електронному мікроскопі.

Для сторонніх організацій:
Необхідним є укладення договору на виконання робіт. Терміни, об’єм і характер робіт виконуються і оплачуються згідно укладеного договору.

Способи передачі зразків:
У випадку попередньої домовленості, зразки можуть бути передані поштою або кур’єром для аналізу нашими спеціалістами. Результати аналізу передаються замовнику у вигляді фотографій на цифрових носіях і, за необхідності, письмового звіту з описом та експертним висновком.
Послуги спеціаліста з пробопідготовки, роботи на мікроскопі і т.п. оговорюються та оплачуються окремо.

Методики

• приготування плівок-підложок із формвару: http://www4.utsouthwestern.edu/mcif/pdfs/formvar.pdf
  https://www.youtube.com/watch?v=u2auPtTtroM
• контрастування зразків: 
  http://www.leica-microsystems.com/science-lab/brief-introduction-to-contrasting-for-em-sample-preparation/ 
  http://www.snaggledworks.com/em_for_dummies/negative_stain.html 
  http://temsamprep.in2p3.fr/fiche/fiche.php?lang=eng&fiche=34 
• заливка зразків в смоли:
  http://it.stlawu.edu/~slumic/TEMprep.pdf
  http://web.path.ox.ac.uk/~bioimaging/documents/fixation_standard.pdf
  http://www.laboratorium.dp.ua/books/Electron-Microscopy-Methods-and-Protocols-Hajibaghery-117.pdf
  http://sharedresources.fhcrc.org/sites/default/files/EMProceduresManual.pdf

Каталог фото